雞毒支原體（MG）核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）

滬崢PCR優勢：

    1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保
所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測。

    2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證。

    3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

    4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

通用名稱：雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

Name  ：MG  Detection Kit (Real-Time PCR Method)

 【包裝規格】50T/盒

   【預期用途】

雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)引起雞滑液囊炎，該病是雞的一種急性或慢性傳染病，以侵害關節的滑液囊膜及腱鞘為主，引起關節滲出性滑膜炎、腱鞘炎及跗關節和腳墊腫脹^[1]，此外還會造成生長發育遲緩、胴體降級、產蛋下降等，并且還與呼吸道疾病相關，給養雞業造成巨大經濟損失^[2]。

本試劑盒適用于檢測鼻腔、氣囊組織、鼻腔、食管、氣管、關節滲出物等樣本中的雞滑液囊支原體，用于雞毒支原體(MG)感染的輔助診斷。

 【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，設計一對雞毒支原體(MG)特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對雞毒支原體(MG)核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)【試劑組成】

1）不同批號試劑不能混用。

2）試劑盒內各試劑組份足夠包裝規格所標示的檢測次數。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過5次，有效期12個月。

 適用儀器】

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

 標本采集】

    病死或撲殺禽，從鼻腔、氣管或氣囊、關節滲出物；活禽取鼻腔、食管、氣管拭子、注射器穿刺吸取關節液

 【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)【使用方法】

樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g，手術剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；液體樣品，直接取100μL提取

 DNA提取

• DNA的提取也可以采用（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

 試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照；樣品每滿7份，多配制1份)，每測試反應體系配制如下表：

 加樣（樣本處理區）

將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

 PCR擴增（核酸擴增區）

• 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內；
• 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

• 推薦循環參數設置：

結果分析判定

設置Baseline和Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節Baseline的start值(一般可在3~15范圍內調節)、stop值(一般可在5~20范圍內調節)，以及Threshold的Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

結果判斷

陽性：檢測通道Ct值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線；

可疑：檢測通道35<Ct值≤38，建議重復檢測，如果檢測通道仍為35<Ct值≤38，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果Ct值>38或無Ct值。

質控標準

陰性質控品：Ct>38或無Ct值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且Ct值≤32；

以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

 檢測方法的局限性

• 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
• 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
• 陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
• 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
• 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
• 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；
• 本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

 【注意事項】

• 所有操作嚴格按照說明書進行；
• 試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完全混勻并短暫離心；
• 反應液應避光保存；
• 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
• 使用一次性吸頭、一次性手套和各區工作服；
• 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
• 實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
• 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。